Les Boss de Dark Souls sont de puissants ennemis uniques. On les distingue aisément des autres ennemis grâce à leur barre de vie ainsi qu'à leur nom, visibles en gros sur l'écran. De plus, il est nécessaire de traverser un mur de brouillard blanc pour y accéder.
Certains boss sont optionnels et les combattre n'est pas nécessaire pour terminer le jeu. Il existe en plus d'autres ennemis uniques relativement puissants, mais inférieurs aux autres Boss, qu'on nomme communément Mini-Boss.
Il existe 26 Boss dans Dark Souls, ceux marqué d'une étoile sont des boss optionnels :
Lordran[]
Refuge nord des morts-vivants[]
- Démon du refuge
- Démon errant*
Village des morts-vivants[]
- Démon Taureau*
- Démon Capra*
Paroisse des morts-vivants[]
- Gargouilles de la cloche
Profondeurs[]
- Dragon béant*
Domaine de Quelaag[]
- Quelaag la Sorcière du Chaos
Jardin de Noiresouche[]
- Papillon de Clair de Lune*
- Sif le Grand Loup gris
Forteresse de Sen[]
Anor Londo[]
- Ornstein le Tueur de Dragons et Smough le Bourreau
- Gwendolin le Soleil noir*
Monde peint d'Ariamis[]
- Priscilla la Métissée*
Archives du Duc, Cavernes de cristal[]
- Seath l'écorché
Catacombes[]
Tombeau des Géants[]
- Seigneur des tombes Nito
Ruines de la Nouvelle Londo[]
- Quatre Rois
Ruines démoniaques[]
- Décharge incessante
- Pyro-sage démoniaque
- Démon mille-patte*
Izalith la perdue[]
- Foyer du Chaos
Kiln de la Première Flamme[]
Oolacile[]
Les boss situés à Oolacile ne sont disponibles qu'avec le DLC Artorias of the Abyss.
Jardin du sanctuaire[]
- Gardien du sanctuaire
Forêt royale[]
- Chevalier Artorias, le Marche-Abysse
- Kalameet, le Dragon noir*